Περιεχόμενο

• Οδηγίες
• Ανάκτηση της στήλης
• Πώς
• Ανακοίνωση
• Τι χρειάζεστε

Η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) είναι μια κοινή μέθοδος εργαστηριακής ανάλυσης στην οποία ένα δείγμα διαχωρίζεται στα χημικά του συστατικά καθώς διέρχεται από μια στήλη. Αυτή η στήλη γεμίζεται με ένα πορώδες υλικό, τυπικά σιλικαζέλ. Μια τυπική στήλη αντίστροφης φάσης, όπως το C8, μπορεί μερικές φορές να φράξει ή να μολυνθεί. Αυτές οι στήλες μπορούν να ανακτηθούν χρησιμοποιώντας πολύ απλές τεχνικές.

Οδηγίες

Ο σωστός διαλύτης μπορεί να ανακτήσει μια βρώμικη στήλη (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Ανάκτηση της στήλης

1. Απελευθερώστε τη στήλη και αναστρέψτε τη θέση της, έτσι ώστε η κινητή φάση να εισέρχεται πλέον μέσω της κανονικά της εξόδου της στήλης. Συνδέστε μια πρίζα στο άλλο άκρο της στήλης (η οποία ήταν η αρχική καταχώρηση) και αφήστε την να αποστραγγιστεί.

2. Αναρροφήστε μια σειρά από διαλύτες με τη σειρά της μείωσης της πολικότητας. Μια συνιστώμενη βασική σειρά είναι να ξεκινήσει με μεθανόλη, στη συνέχεια να μετατραπεί σε ακετονιτρίλιο, κατόπιν σε ακετονιτρίλιο / ισοπροπανόλη (75:25), ισοπροπανόλη, μεθυλενοχλωρίδιο και εξάνιο. Εάν η κινητή φάση που ήταν στη στήλη ήταν απορροφητική, συνιστάται η μετάβαση με νερό πριν σε μεθανόλη. Μία ροή ενός έως δύο χιλιοστολίτρων ανά λεπτό είναι επαρκής και πρέπει να αντληθούν περίπου 10 στήλες όγκου από κάθε διαλύτη. Η στήλη όγκου είναι ο εσωτερικός χώρος της στήλης και υπολογίζεται με (0.7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), όπου DI είναι η εσωτερική διάμετρος της στήλης και L είναι το μήκος.

   
   

3. Αναρροφήστε ακόμη δέκα όγκους ισοπροπανόλης μέσω της στήλης για να την παρασκευάσετε για χρήση με την αρχική κινητή φάση. Εάν η αρχική κινητή φάση έχει αποσβεσθεί, αντλούμε νερό μέσω της στήλης μετά την ισοπροπανόλη, πριν επιστρέψετε στην αρχική κινητή φάση.

4. Απελευθερώστε τη στήλη, αντιστρέψτε την και ενεργοποιήστε ξανά, έτσι ώστε να βρίσκεται στην αρχική της θέση (έτσι ώστε η κινητή φάση να εισέρχεται στη δεξιά πλευρά της στήλης). Επανασυνδέστε την έξοδο του ηχείου στον ανιχνευτή.

Πώς

• Αν αυτή η διεργασία δεν καθαρίσει πλήρως τη στήλη, μπορεί να χρησιμοποιηθεί ένα μίγμα 50:50 διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO) και διμεθυλοφορμαμιδίου (DMF). Τα υπολείμματα πρωτεϊνών και ιόντων μετάλλων μπορεί να απαιτούν άλλους τύπους διαλυτών, όπως αντιδραστήρια εξοικονόμησης ιόντων ή διάλυμα αιθυλενοδιαμινοτετραοξικού οξέος (ΕϋΤΑ).

Ανακοίνωση

• Σε ορισμένες συσκευές, η σπονδυλική στήλη θα έχει ένα τραχύ μεταλλικό κόσκινο ως είσοδο. Στην περίπτωση αυτή, η επαναφορά της στήλης θα επιτρέψει στη στατική φάση να εξέλθει από τη στήλη και αυτό δεν συνιστάται. Συμβουλευτείτε τον αντιπρόσωπό σας εάν δεν είστε βέβαιοι.
• Ο διαλύτης που χρησιμοποιείται σε αυτή τη διαδικασία είναι δυνητικά τοξικός κατά την κατάποση και την εισπνοή. Χρησιμοποιείτε κανονικές εργαστηριακές προφυλάξεις κατά το χειρισμό.

Τι χρειάζεστε

• Συσκευή HPLC
• Νερό
• Μεθανόλη
• Ακετονιτρίλιο
• Ισοπροπανόλη
• Μεθυλενοχλωρίδιο
• Εξάνιο