Περιεχόμενο
Υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) είναι ένα εργαλείο που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό ουσιών από ένα μείγμα. Ο διαχωρισμός και η ταυτοποίηση ορισμένων χημικών γίνεται κυρίως στη χρωματογραφική στήλη του συστήματος. Πολλοί τύποι στηλών είναι διαθέσιμοι για το CLAE και ο καθένας χρησιμοποιείται για έναν συγκεκριμένο τύπο ανάλυσης. Η στήλη C18 είναι η ισχυρότερη μη πολική που χρησιμοποιείται γενικά. Μετά από συνεχή χρήση για μεγάλο χρονικό διάστημα, ο ρυθμός ροής του διαλύτη μέσω αυτού μειώνεται και ο χρόνος ανάλυσης αυξάνεται. Μια άλλη αιτία της μείωσης του χρόνου ανάλυσης είναι να έχουμε δείγματα που αφήνουν μικρές ποσότητες χημικών στο υλικό της στήλης, μειώνοντας την ικανότητα διαχωρισμού τους. Η αποκατάσταση της επιφάνειάς του μπορεί να γίνει με επεξεργασία του υλικού με μια σειρά ειδικών διαλυτών για να το καθαρίσει από τυχόν υπόλοιπα δείγματα και να αναζωογονήσει το υποστηρικτικό υλικό.
Βήμα 1
Αφαιρέστε τη στήλη C18 από την κατεύθυνση ροής και τοποθετήστε την στην αντίθετη κατεύθυνση. Η επαναφορά του διαλύτη θα ανακουφίσει το αποτέλεσμα συσσώρευσης που εμφανίζεται με την πάροδο του χρόνου. Πρέπει να προσέξετε να μην αφήσετε πολύ υλικό που συσσωρεύεται στο τέλος της στήλης. Ορισμένα εργοστάσια χρησιμοποιούν ένα μεγαλύτερο πλέγμα στην κορυφή έτσι ώστε όταν η ροή αλλάζει κατεύθυνση, το πλέγμα είναι στην παρακάτω θέση. Αυτή η μέθοδος αποκατάστασης ονομάζεται αντιστροφή ροής. Για να αποτρέψετε τη ροή συσσώρευσης στον ανιχνευτή συστήματος και πιθανώς να προκαλέσει εμπόδιο, αφήστε τον να λειτουργήσει χωρίς να συνδεθεί ο ανιχνευτής και να κατευθύνει τη ροή από τη στήλη στη διάθεση.
Βήμα 2
Τοποθετήστε το σωλήνα διέλευσης διαλύτη σε μια σειρά διαλυτών για να εκλούσετε οποιαδήποτε ένωση που συγκρατείται στη στήλη στην αντίθετη κατεύθυνση. Αυτοί οι διαλύτες ποικίλουν στα υδρόφιλα χαρακτηριστικά τους. Μεταβάλλοντάς τα, θα εκλούσετε ενώσεις εξίσου διαφορετικής υδρόφιλης φύσης. Χρησιμοποιήστε διαδοχικά 50 ml από καθέναν από τους ακόλουθους διαλύτες: νερό (εάν χρησιμοποιείτε ρυθμιστικό διάλυμα), μεθανόλη, ισοπροπανόλη, διχλωρομεθάνιο, εξάνιο, διχλωρομεθάνιο και ισοπροπανόλη.
Βήμα 3
Αντικαταστήστε τη στήλη προς τη σωστή κατεύθυνση και κάντε το διαλύτη σας να περάσει από αυτήν. Χρησιμοποιήστε τουλάχιστον 75 ml για να το πλύνετε πριν συνεχίσετε. Δοκιμάστε το με ένα μοτίβο που χρησιμοποιήσατε όταν ήταν νέο και ελέγξτε τα αποτελέσματα. Δώστε προσοχή κατά την επίτευξη των μέγιστων σημείων συγκράτησης και του συνολικού χρόνου ανάλυσης. Ο βαθμός στον οποίο αυτά τα χαρακτηριστικά ταιριάζουν με την αρχική δοκιμή, όταν ήταν ακόμη νέα, θα δείξει τον βαθμό στον οποίο αποκαταστάθηκε η στήλη. Εάν τα αποτελέσματα δεν είναι ικανοποιητικά, αντικαταστήστε τη στήλη με μια νέα και πετάξτε την παλιά.
