Περιεχόμενο
Όταν παρακολουθείτε μικροβιολογία υψηλότερου επιπέδου, ο δάσκαλός σας μπορεί να σας ζητήσει να ολοκληρώσετε ένα έργο στο οποίο πρέπει να εντοπίσετε ένα άγνωστο βακτήριο μέσω μιας σειράς δοκιμών. Για να αναγνωρίσουμε σωστά αυτά τα βακτήρια, είναι απαραίτητο να έχουμε όλο τον κατάλληλο εργαστηριακό εξοπλισμό και να γνωρίζουμε διάφορες εργαστηριακές διαδικασίες. Είναι επίσης ωφέλιμο να έχετε ένα διάγραμμα ροής των βακτηρίων και τις εργαστηριακές δοκιμές τους, ώστε να μπορείτε να αναγνωρίσετε τα βακτήρια σας.
Οδηγίες
Οι πλάκες καλλιέργειας επιτρέπουν την απομόνωση των βακτηρίων ώστε να αναγνωρίζουν εύκολα τα χαρακτηριστικά τους (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)-
Προετοιμάστε όλες τις δοκιμές πριν ξεκινήσετε το πείραμα. Αυτό περιλαμβάνει την προετοιμασία των πλακών και των σωλήνων άγαρ, καθώς και την προετοιμασία των απαραίτητων δεικτών, όπως το αντιδραστήριο του Kovac. Ετικέστε όλα τα σωληνάρια και τις πλάκες κατάλληλα, ώστε να μην αναμειγνύονται, οδηγώντας σε εσφαλμένα αποτελέσματα.
-
Σπέρνετε τα βακτήρια σας. Αυτό θα καθορίσει το σχήμα και το χρώμα του βακτηριδίου σας, όπως το θετικό κατά gram (πορφυρό), το αρνητικό κατά gram (κόκκινο ή ροζ), οι καρύδες (κυκλική), οι σπειροειδείς ή οι ράβδοι. Για να σπείρετε το βακτήριο σας, θα χρειαστείτε μια καθαρή λεπίδα, νερό, κρυσταλλωμένο ιώδες, ιώδιο, λευκαντικό, σαφρανίνη, απορροφητικό χαρτί, μικροσκόπιο φωτός και μερικές χαρτοπετσέτες. Αφού αδειάσετε τον βρόχο, χρησιμοποιήστε το για να τοποθετήσετε μια σταγόνα νερού στη λεπίδα. Αφαιρέστε ξανά το βρόχο και στη συνέχεια τοποθετήστε μια μικρή ποσότητα των άγνωστων βακτηρίων σας στην σταγόνα νερού. Περάστε τη λεπίδα πάνω από τη φλόγα μερικές φορές για να στεγνώσει και να συνδέσετε πλήρως τα βακτήρια με τη λεπίδα. Καλύψτε το με κρυσταλλωμένο ιώδες, αφήστε το για ένα λεπτό και στη συνέχεια πλύντε απαλά. Στη συνέχεια, καλύψτε τη λεπίδα με ιώδιο. Αφήστε το για 30 δευτερόλεπτα και στη συνέχεια πλύνετε. Τοποθετήστε ένα κομμάτι απορροφητικού χαρτιού πάνω από τη λεπίδα για να αφαιρέσετε την περίσσεια νερού. Στη συνέχεια ρίξτε το λευκαντικό πάνω στη λεπίδα. Μετά από πέντε δευτερόλεπτα, πλύνετε για να αφαιρέσετε το λευκαντικό. Τέλος, καλύψτε τη λεπίδα με σαφρανίνη. Μετά από 40 δευτερόλεπτα, πλύνετε τη λεπίδα και στεγνώστε την απαλά με χαρτοπετσέτα. Τοποθετήστε μια σταγόνα λάδι στην περιοχή των βακτηρίων στη διαφάνεια και κοιτάξτε κάτω από το μικροσκόπιο. Σημειώστε το σχήμα και το χρώμα των ορατών βακτηρίων.
-
Δοκιμάστε την οξειδάση στα βακτήρια σας. Για αυτό θα χρειαστείτε ένα φίλτρο χαρτιού, ένα αντιδραστήριο οξειδάσης, Ε. Coli, Pseudomonas και τα άγνωστα βακτηρίδια του. Σε αυτή τη δοκιμή, τα Ε. Coli και Pseudomonas είναι οι έλεγχοι. Το βακτήριο σας πρέπει να είναι ηλικίας μικρότερης των 24 ωρών για αυτή τη δοκιμή. Αφαιρέστε τη λαβή και τοποθετήστε μια μικρή ποσότητα από κάθε βακτήριο σε ένα φίλτρο χαρτιού. Χρησιμοποιήστε ένα σταγονόμετρο για να τοποθετήσετε μία σταγόνα της οξειδάσης του αντιδραστηρίου σε κάθε βακτήριο. Μετά από 10 δευτερόλεπτα, σημειώστε το χρώμα κάθε βακτηριδίου. Το E. coli θα δώσει θετικό αποτέλεσμα και το Pseudomonas θα δώσει αρνητικό αποτέλεσμα. Τα βακτήρια που είναι θετικά για το ένζυμο της κυτοχρωμικής οξειδάσης θα καταστούν πορφυρά και τα αρνητικά βακτήρια δεν θα αλλάξουν χρώμα.
-
Δοκιμή για υδρόθειο (SIM). Τραβήξτε τη λαβή και χρησιμοποιήστε την για να πάρει κάποια βακτήρια από την πλάκα. Ενοφθαλμίστε το σωληνάριο SIM με τα βακτηρίδια σας και καλύψτε το. Αφήστε αυτόν τον σωλήνα στο φούρνο για 18 έως 24 ώρες στους 37 ° C. Προσδιορίστε εάν το βακτήριο σας είναι κινητό (έχει μαστίγιο). Εάν υπάρχει ανάπτυξη και θολερότητα μακριά από το σημείο όπου εμβολιάσατε τα βακτηρίδια, είναι κινητό. Στη συνέχεια, τοποθετήστε δύο σταγόνες αντιδραστηρίου Kovac στο σωλήνα. Εάν έχει κάποια αλλαγή χρώματος σε κόκκινο ή ροζ, το βακτήριο του είναι θετικό για αυτή τη δοκιμασία και περιέχει τρυπτοφάνη, οπότε είναι παραγωγός ινδολίου. Εάν ο σωλήνας γίνει μαύρος, τα βακτηρίδια του παράγουν υδρόθειο.
-
Εκτελέστε μια δοκιμασία κιτρικού Simmon. Εμβολιάστε τα βακτηρίδια σε δύο δοκιμαστικούς σωλήνες με άγαρ του Simmon. Αφήστε τα στο φούρνο για 18 έως 24 ώρες στους 37 ° C. Το άγαρ είναι αρχικά πράσινο, αλλά αν τα βακτήρια σας χρησιμοποιούν κιτρικό άλας ως πηγή άνθρακα, το χρώμα θα αλλάξει από πράσινο σε μπλε. Το μπλε είναι το θετικό αποτέλεσμα. Εάν οι σωλήνες παραμένουν πράσινοι, τα βακτηρίδια τους είναι αρνητικά για τη χρήση κιτρικού άλατος ως μία μόνο πηγή άνθρακα.
-
Εκτελέστε μια δοκιμή κόκκινου χρώματος (MRVP). Για αυτή τη δοκιμή χρειάζεστε δύο σωλήνες που περιέχουν ένα διάλυμα πεπτόνης, ρυθμιστικά διαλύματα και δεξτρόζη (ή γλυκόζη). Ενοφθαλμίστε κάθε σωλήνα με τα άγνωστα βακτήρια και επιστρέψτε στη σόμπα για 18 έως 24 ώρες στους 37 ° C. Όταν είναι έτοιμο, προσθέστε τρεις σταγόνες κόκκινου χρώματος σε ένα σωληνάριο. Αυτός θα είναι ο σωλήνας MR. Εάν ο σωλήνας αλλάξει από κίτρινο σε κόκκινο, το βακτήριο του είναι θετικό και χρησιμοποιεί μια μικτή οδό οξέος κατά τη ζύμωση (παράγονται γαλακτικά, οξικά και μυρμηκικά οξέα). Στο δεύτερο σωλήνα, προσθέστε τρεις σταγόνες του αντιδραστηρίου VP. Αν ο σωλήνας γίνει κόκκινο, τα βακτήρια είναι θετικά για το σχηματισμό διακετυλίου, ενός προϊόντος ζύμωσης. Εάν ο σωλήνας γίνει καφέ, το βακτήριο σας είναι αρνητικό.
-
Βρείτε τα βακτήρια σας επισημαίνοντας τα θετικά και αρνητικά αποτελέσματα στο διάγραμμα ροής.