Περιεχόμενο
- Σπάζοντας τους τοίχους κυψελών
- Αφαίρεση λιπιδίων
- Αφαίρεση πρωτεϊνών
- Καταβύθιση του DNA
- Καθαρισμός του DNA
Η ψυχρή αλκοόλη χρησιμοποιείται για να διαχωρίσει το DNA από διαλύματα με βάση το νερό, επιτρέποντάς του να καθαριστεί για επακόλουθο γενετικό έλεγχο. Η προσθήκη αλκοόλης σε διάλυμα που περιέχει DNA είναι ένας απλός τρόπος για να γίνει καθαρός σε χαμηλότερες θερμοκρασίες και να επιβραδύνει τα ένζυμα που το αποικοδομούν, δίνοντας καλύτερα αποτελέσματα εξαγωγής.
Σπάζοντας τους τοίχους κυψελών
Οι διαδικασίες εκχύλισης για τη λήψη καθαρού ϋΝΑ πρέπει να απαλλαγούν από όλα τα μοριακά και χημικά συστατικά του ιστού από τον οποίο εξάγεται το ϋΝΑ. Τα πρώτα βήματα περιλαμβάνουν την καταστροφή κυτταρικών τοίχων. Αυτό μπορεί να γίνει με διάφορους χημικούς παράγοντες οι οποίοι είναι καυστικοί για τις κυτταρικές μεμβράνες αλλά δεν βλάπτουν το DNA. Τα κύτταρα μπορούν επίσης να υφίστανται υπερήχους, να ομογενοποιούνται ή να αλέθονται για την καταστροφή των μεμβρανών.
Αφαίρεση λιπιδίων
Μόλις καταστραφούν τα τοιχώματα των κυττάρων, προστίθεται ένα απορρυπαντικό για να απαλλαγούμε από τα λίπη και τα έλαια που αποτελούν τις κυτταρικές μεμβράνες. Τα απορρυπαντικά προκαλούν τη διάλυση των λιπών και των λιπών στο διάλυμα.
Αφαίρεση πρωτεϊνών
Οι πρωτεΐνες και τα ένζυμα μπορούν να υποστούν πέψη με προσθήκη πρωτεάσης στο διάλυμα. Οι πρωτεάσες διασπούν τις πρωτεΐνες σε μικρά πεπτίδια και αμινοξέα.
Καταβύθιση του DNA
Η προσθήκη ψυχρής αλκοόλης σε ένα διάλυμα θα κατακρημνίσει και θα συσσωματώσει το DNA. Το γενετικό υλικό μπορεί να συλλέγεται με φυγοκέντρηση του δείγματος και απόχυση του υγρού στρώματος. Θα πρέπει να υπάρχει ως ένα μικρό ίζημα στο κάτω μέρος του σωλήνα φυγοκέντρησης.
Καθαρισμός του DNA
Το ϋΝΑ μπορεί να πλυθεί με επαναιώρηση σε διάλυμα ψυχρής αλκοόλης και να φυγοκεντριστεί εκ νέου αρκετές φορές για να ληφθεί ένα πολύ καθαρό δείγμα. Τυπικές αλκοόλες που χρησιμοποιούνται περιλαμβάνουν αιθανόλη και ισοπροπανόλη. Αυτή η διαδικασία αφήνει ένα πολύ καθαρό δείγμα σε αυστηρές δοκιμές.
